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安全是實(shí)驗(yàn)前提 規(guī)范操作是實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)

發(fā)布時(shí)間:2021-3-12 18:55:51??????點(diǎn)擊:

  離心機(jī)在植物組織蛋白質(zhì)提取中的應(yīng)用講解.

  本文講解的提取方法是采用三氯醋酸—丙酮沉淀法,詳細(xì)步驟如下:

  1、在液氮中研磨葉片

  2、加入樣品體積3倍的提取液在-20℃的條件下過夜,然后離心機(jī)離心(4℃8000rpm以上1小時(shí))棄上清。

  3、加入等體積的冰浴丙酮(含0.07%的β-巰基乙醇),搖勻后離心機(jī)離心(4℃8000rpm以上1小時(shí)),然后真空干燥沉淀,備用。

  4、上樣前加入裂解液,室溫放置30分鐘,使蛋白充分溶于裂解液中,然后離心機(jī)離心(15℃8000rpm以上1小時(shí)或更長時(shí)間以沒有沉淀為標(biāo)準(zhǔn)),可臨時(shí)保存在4℃待用。

  5、用Brandford法定量蛋白,然后可分裝放入-80℃?zhèn)溆谩?/p>

  藥品:

  提取液:含10%TCA和0.07%的β-巰基乙醇的丙酮

  裂解液:2.7g尿素0.2gCHAPS溶于3ml滅菌的去離子水中(終體積為5ml),使用前再加入1M的DTT65ul/ml。

  這種方法針對雙向電泳,雜質(zhì)少,離子濃度小的特點(diǎn)!當(dāng)然單向電泳也同樣適用,只是電泳的條帶會減少!

  注意在離心機(jī)的使用過程中,都必須遵循一些安全要求:

  轉(zhuǎn)鼓的強(qiáng)度計(jì)算應(yīng)符合JB/T 8105使用范圍所界定的規(guī)定,其結(jié)構(gòu)及各零、部件,必須有足夠的強(qiáng)度、剛度和穩(wěn)定性。

  應(yīng)保證在規(guī)定的工作條件下,運(yùn)行安全可靠,并且操作維護(hù)方便,在操作人員遵守操作規(guī)程的條件下,安全防護(hù)裝置應(yīng)確保人身的安全。

  在按規(guī)定條件制造、安裝、貯運(yùn)和使用時(shí),不得對人身安全構(gòu)成威脅和造成傷害。

  離心機(jī)密閉防爆要求

  1)處于密閉、易燃、易爆環(huán)境或潮濕環(huán)境下工作的離心機(jī),應(yīng)符合密閉、防燃、防爆、防濕等有關(guān)標(biāo)準(zhǔn)或法規(guī)的要求。

  2)處于密閉、易燃、易爆環(huán)境或潮濕環(huán)境下工作的離心機(jī),應(yīng)有可靠的安全防護(hù)措施。

  上海盧湘儀離心機(jī)儀器有限公司作為經(jīng)驗(yàn)豐富的離心機(jī)廠家,在設(shè)計(jì)制造離心機(jī)以及培訓(xùn)使用離心機(jī)的時(shí)候,嚴(yán)格按照以上要求執(zhí)行!


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