高速離心機(jī)分離植物細(xì)胞膜的方法
發(fā)布時(shí)間：2015-5-13 17:42:11??????點(diǎn)擊：
化學(xué)實(shí)驗(yàn)室離心機(jī)選用盧湘儀H2050臺式高速大容量離心機(jī)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。我給你一種用藥品比較少的。你結(jié)合自己的情況看一下。
另這種方法得到的質(zhì)膜多數(shù)是微囊泡。
這種方法我們成功提取過擬南芥，玉米胚芽鞘，煙草懸浮細(xì)胞的質(zhì)膜。
1，組織破碎，你可以用研本。如果存在大量粗纖維的話，你還可以用紗布過濾一下。
裂解液配方，0.55M 蔗糖；0.76M Tris; 0.02M EDTA; 0.03M 抗壞血酸。用Hcl 調(diào)整HP 到7.8。
原料/裂解液 1：2
2， 研磨液 分3次低速離心分離出那些不需要的組織殘?jiān)蚣?xì)胞器。 100G 10min ; 3000G 5min ; 17000G 15min。（速度不夠的話適當(dāng)延長時(shí)間，否則懸浮液中會存在大量的線粒體之類的細(xì)胞器）。
3， 上一步得到的懸浮液是含有總膜的懸浮液，一般情況下， 下一步應(yīng)該利用高速離心20000G以上的離心力，把所有的膜沉淀出來進(jìn)一步純化（這里你最好找個(gè)高速離心機(jī)，推薦選用H2050臺式高速大容量離心機(jī)，離心力如果不夠分離不出來，如果原料非常多的話可能會析出一些，你也可以試著改變下裂解液的蔗糖濃度，理論上密度變了以后沉降系數(shù)也會改變，不過這個(gè)要做大量的計(jì)算工作以確保不影響膜的純度）。純化有PEG/Dextran; 蔗糖梯度兩種方法， 蔗糖梯度比較老了，效果不是很好，但是蔗糖很便宜很好弄。我們用的是6.3%PEG/Dextran 。
另這種方法得到的質(zhì)膜多數(shù)是微囊泡。
這種方法我們成功提取過擬南芥，玉米胚芽鞘，煙草懸浮細(xì)胞的質(zhì)膜。
1，組織破碎，你可以用研本。如果存在大量粗纖維的話，你還可以用紗布過濾一下。
裂解液配方，0.55M 蔗糖；0.76M Tris; 0.02M EDTA; 0.03M 抗壞血酸。用Hcl 調(diào)整HP 到7.8。
原料/裂解液 1：2
2， 研磨液 分3次低速離心分離出那些不需要的組織殘?jiān)蚣?xì)胞器。 100G 10min ; 3000G 5min ; 17000G 15min。（速度不夠的話適當(dāng)延長時(shí)間，否則懸浮液中會存在大量的線粒體之類的細(xì)胞器）。
3， 上一步得到的懸浮液是含有總膜的懸浮液，一般情況下， 下一步應(yīng)該利用高速離心20000G以上的離心力，把所有的膜沉淀出來進(jìn)一步純化（這里你最好找個(gè)高速離心機(jī)，推薦選用H2050臺式高速大容量離心機(jī)，離心力如果不夠分離不出來，如果原料非常多的話可能會析出一些，你也可以試著改變下裂解液的蔗糖濃度，理論上密度變了以后沉降系數(shù)也會改變，不過這個(gè)要做大量的計(jì)算工作以確保不影響膜的純度）。純化有PEG/Dextran; 蔗糖梯度兩種方法， 蔗糖梯度比較老了，效果不是很好，但是蔗糖很便宜很好弄。我們用的是6.3%PEG/Dextran 。
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